Diabetologia：激活但功能毁坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到人锥体内自身病原锥体到注意到1改型肝炎检验病症的重大突破率在学童时期就有很好的所述，多个人锥体内自身病原锥体无病症的学童里面有70%在血清转换成后10年底患上肝炎，而随访15年的学童这一比率上升到84%。相比之下，占检验1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发作机制还无法取得充分的研究课题。

愈来愈多的人开始用到有种系统种系统来概念1改型肝炎的重大突破：个锥体在注意到多种人锥体内自身病原锥体时进入第1先决条件，注意到浓度异常时进入第2先决条件，注意到病症时进入第3先决条件。一些多发人锥体内自身病原锥体无病症的个锥体，在1期和2期，重大突破极快，并发展为发作的1改型肝炎。我们此前所述了一三组在首次检测到多种人锥体内自身病原锥体取样后非常少10年无肝炎的极慢重大突破者，这三组病人人数少，但相似性非常明确。随后，我们找到人锥体内自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞膜底物当在重大突破加速的病人里面基本不普遍存在，但在近来发作和长期普遍存在的肝炎病人里面很更易检测到。这可能表明，与重大突破病人相比，这些病人自身免疫底物当的恒定加强。

早期研究课题表明，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数目也就是说，但肝炎病人普遍存在一些新功能毛病，其里面包含对IL-2的底物当灵活性降低。此外，肝炎病人里面的物理现象当CD4+T细胞膜可能对恒定更具抵抗性，表现为物理现象当T细胞膜的抑止加强，自然造成的Treg和锥体外造成的诱导Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞膜里面IL-2底物当加强。本研究课题的借以是所述了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在一小群极加速重大突破者里面的相似性，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究课题是一项以老年人基础上的纵向研究课题，在21岁不限确诊的病人亲属里面检查1改型肝炎的危险因素。我们此前所述了长期加速重大突破者的相似性，他们依然多重人锥体内自身病原锥体无病症将近10年，但无法注意到肝炎的检验病症，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名此前依然无肝炎并愿意提供大量血浆取样的加速重大突破者确立T和B细胞膜新功能统计分析。在迄今的研究课题里面，8名慢重大突破者(SP三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的人锥体内自身病原锥体无病症。所有的行动者都受制于1改型肝炎重大突破的1期，尽管一些人随后失去了人锥体内自身病原锥体对某些淋巴细胞的无病症底物当，然而，一名病人早已受制于2期非常少6年，但无法注意到检验病症，一名病人被检验为肝炎，该受试者72岁，在搜集科学实验取样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里面对该NAD展开了直接分析报告。裂解外周血单个核分裂细胞膜(PBMCs)，引入多给定流式细胞膜忍术和T细胞膜抑止试验里面分析报告NAD里面Treg的高频率、表改型和新功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和回归)展开无监督聚类统计分析，分析报告Treg表改型。

结果：与有益NAD相比，来自慢重大突破锥体的遗忘CD4+T细胞膜的监督聚类显示，抑制的遗忘CD4+ Treg高频率上升，与糖皮质激素诱导的TNFR无关蛋白(GITR)问到上升有关。一名HbA1c上升的病人与重大突破加速者和冗余的结果表明相比，Treg谱有所并不相同。新功能统计分析表明，与有益NAD相比，来自加速重大突破锥体的Treg细胞膜内的CD4+物理现象当T细胞膜抑止明显受损。表现为对物理现象当CD4+T细胞膜CD25和CD134问到的抑止上升。

示意图1 种系统地的表改型统计分析显示，CD4+Treg亚改型在慢重大突破字段里面上升。由FlowSOM聚合的Treg四楼，群聚在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标记物问到鉴定不止10个元簇:遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个并不相同Treg标记聚合的10个元簇的MST。每个节点推选一个坦克部队(100个坦克部队)，巨大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点三组四周成品。每个节点里面的饼示意图问到单个标记的问到级别。(b)每个元聚类的热示意图，以显示整锥体标记问到。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)聚合示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相比丰度为每个metacluster装支线示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞膜(l)。橘色圆圈推选人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模改型证实，Treg高频率的上升是重大突破加速的标识。分级除此以外(a - f)和水果统计分析(g-k)比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的标识性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR问到展开裂解，虚拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)三组以及NADSP 606(橘色)里面CD25+ cd127的高频率核心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的装支线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3问到风速图例，左下角突不止的簇被识别为SP和HD字段错综复杂的并不相同。(j)装支线示意图显示了在SP(虎纹)和HD(灰点)三组里面，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比丰度(比率)。(k)直方示意图显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg标记相比问到与氛围问到(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。氛围与所有其他簇里面标记的问到有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

示意图3 与有益献血者相比，重大突破加速者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T细胞膜元簇(遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个问到标记的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的问到热示意图(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR问到串联，显示直方示意图(c)和核心内容示意图(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NAD包含，p< 0.05(蓝色)NADSP 606和冗余的HD不包含在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR问到，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，显示直方示意图(e)和核心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

示意图4 来自加速重大突破的CD4+ treg细胞膜控制物理现象当CD4+T细胞膜的灵活性降低。SP三组用蓝色的支线和圆圈问到，HD三组用灰色的支线和圆圈问到，橘色的支线/圆圈问到NADsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(应当答者)被标记为CFSE, Treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，人才培养3天后展开流式细胞膜忍术检测。(a-d)与CD4+应当答者相比应当的treg人才培养(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者人才培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。用到无病症对照(抑制的响应当细胞膜分别为treg)计算抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 物理现象当CD4+T细胞膜对加速重大突破的T细胞膜活化的抑止更脆弱。SP三组用蓝色的支线和圆圈问到，HD三组用灰色的支线和圆圈问到，橘色的支线/圆圈问到NADsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标记，treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，人才培养3天后展开流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同人才培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的问到。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得不止的推论是，来自加速重大突破子的活化遗忘CD4+Treg在GITR问到里面取得了扩展和独特，强调了进一步研究课题Treg在1改型肝炎风险个锥体里面的举例来说的合理性。

原意不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28