Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身血清到浮现1DF高血压临床研究症状的令人满意率在成年人时期就有很好的详细描述，多个胰脏自身血清白血病的成年人里有70%在毒素转换后10年里身患高血压，而随访15年的成年人这一比率减少到84%。远比之下，占临床研究1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的胃癌机制还不会想得到应有的研究课题。

越来越多的人开始可用分期种系统来定义1DF高血压的令人满意：生殖在浮现多种胰脏自身血清时转至第1阶段性，浮现血糖间歇性时转至第2阶段性，浮现症状时转至第3阶段性。一些多发胰脏自身血清白血病的生殖，在1期和2期，令人满意较较慢，并发展为胃癌的1DF高血压。我们以前详细描述了一组成员在首次检测到多种胰脏自身血清结果显示后至少10年无高血压的极较慢令人满意者，这组成员高血压人数少，但基本特征极其完全一致。随后，我们断定胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞连锁反应自由基在令人满意快速的高血压里基本上不发挥作用，但在现阶段胃癌和仍然发挥作用的高血压高血压里很容易检测到。这确实暗示，与令人满意高血压远比，这些高血压性疾病自由基的调节增强。

早期研究课题暗示，尽管调节性T细胞连锁反应(Treg)使用量正常，但高血压高血压发挥作用一些机能缺陷，其里还包括对IL-2的自由基能力降低。此外，高血压高血压里的不稳定性CD4+T细胞连锁反应确实对调节更具抵抗性，表现为不稳定性T细胞连锁反应的消除减弱，共存消除的Treg和基底外消除的作用于Treg，以及抗原漫长的CD4+T细胞连锁反应里IL-2自由基减弱。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞连锁反应(Treg)在一小群极快速令人满意者里的基本特征，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

分析方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的侧向研究课题，在21岁表列复发的高血压直系亲属里检查1DF高血压的小心因素。我们以前详细描述了仍然快速令人满意者的基本特征，他们保持一致多重胰脏自身血清白血病超过10年，但不会浮现高血压的临床研究症状，较慢性或非进行时性性疾病。随后，10名独自保持一致无高血压并愿意给予大量基底液结果显示的快速令人满意者归属于T和B细胞连锁反应机能分析。在目前的研究课题里，8名较慢令人满意者(SP组成员)，里位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁里间的胰脏自身血清白血病。所有的自发性都属于1DF高血压令人满意的1期，尽管一些人随后夺去了胰脏自身血清对某些抗原的白血病自由基，然而，一名高血压已经属于2期至少6年，但不会浮现临床研究症状，一名高血压被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集科学研究结果显示时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学里对该ADP进行时了单独分析报告。转化外周血单个连锁反应细胞连锁反应(PBMCs)，采用多变量流式细胞连锁反应术和T细胞连锁反应消除试验分析报告ADP里Treg的Hz、表DF和机能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)进行时无督导聚类分析，分析报告Treg表DF。

结果：与卫生ADP远比，来自较慢令人满意基底的失忆CD4+T细胞连锁反应的督导聚类暗示，触发的失忆CD4+ TregHz减少，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)表述减少有关。一名HbA1c升温的高血压与令人满意快速者和匹配的控制组成员远比，Treg磬有所各不相同。机能分析暗示，与卫生ADP远比，来自快速令人满意基底的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞连锁反应消除值得注意受损。表现为对不稳定性CD4+T细胞连锁反应CD25和CD134表述的消除减少。

示意图1 深入的表DF分析暗示，CD4+Treg亚DF在较慢令人满意配置文件里减少。由FlowSOM生成的Treg过道，有数在来自所有ADP的光阴CD4+CD45RA -细胞连锁反应上。根据标示出物表述鉴定出10个元簇:失忆T细胞连锁反应_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞连锁反应;HLA-DR + GITR +失忆T细胞连锁反应;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个各不相同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个路由代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在路由组成员周围上色。每个路由里的糕示意图问到单个标示出的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以暗示整基底标示出表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相比丰度为每个metacluster罐本站示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞连锁反应(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞连锁反应(l)。暗红色边框代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组记号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 可用CITRUS的预测模DF证实，TregHz的减少是令人满意快速的标志。分级旁路(a - f)和玉米分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞连锁反应上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR表述进行时转化，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及ADPSP 606(暗红色)里CD25+ cd127的Hz统计示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路空集的罐本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件里间的各不相同。(j)罐本站示意图暗示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员里，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比丰度(比率)。(k)概率分布暗示每个簇的表DF(暗红色)和Treg标示出相比表述与背景表述(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇里标示出的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组记号秩检验

示意图3 与卫生献血者远比，令人满意快速者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T细胞连锁反应元簇(失忆T细胞连锁反应_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞连锁反应;HLA-DR + GITR +失忆T细胞连锁反应;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(暗红色)的FlowSOM GITR表述串联，暗示概率分布(c)和统计示意图(d)。Wilcoxon一组记号秩和检验，p< 0.07(暗红色)所有ADP还包括，p< 0.05(蓝色)ADPSP 606和匹配的HD不还包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从分级旁路，从所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(暗红色)串联，暗示概率分布(e)和统计示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组记号秩检验

示意图4 来自快速令人满意的CD4+ treg细胞连锁反应控制不稳定性CD4+T细胞连锁反应的能力降低。SP组成员用蓝色的本站和边框问到，HD组成员用黑色的本站和边框问到，暗红色的本站/边框问到ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反应进行时分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示出为CFSE, Treg按观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠增殖细胞连锁反应，指导3天后进行时流式细胞连锁反应术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相比应的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除比率。可用白血病对照(触发的组织起来细胞连锁反应不含treg)量化消除比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 不稳定性CD4+T细胞连锁反应对快速令人满意的T细胞连锁反应增殖的消除更敏感。SP组成员用蓝色的本站和边框问到，HD组成员用黑色的本站和边框问到，暗红色的本站/边框问到ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反应进行时分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示出，treg按观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠增殖细胞连锁反应，指导3天后进行时流式细胞连锁反应术(CD25反染)和细胞连锁反应因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速令人满意子的增殖失忆CD4+Treg在GITR表述里想得到了扩展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1DF高血压不确定性生殖里的互补的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28