Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失人质内自身免疫球蛋白到消失1HG肝炎病理症状的成果率在成人时期就有极佳的描绘出，多个人质内自身免疫球蛋白特征性的成人中都有70%在血液循环反转后10年内身患肝炎，而随访15年的成人这一比例缩减到84%。一般来说来说之下，占病理1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的得病机制还无法想得到更进一步的数据分析。

愈发多的人开始常用分期的系统来判别1HG肝炎的成果：形态在消失多种人质内自身免疫球蛋白时转至第1先决条件，消失血糖异常时转至第2先决条件，消失症状时转至第3先决条件。一些多发人质内自身免疫球蛋白特征性的形态，在1期和2期，成果较很慢，并发展为得病的1HG肝炎。我们之后描绘出了一三组在首次验证到多种人质内自身免疫球蛋白抽样后多于10年无肝炎的极很慢成果者，这三组病患人数少，但特性非常明确。随后，我们挖掘出人质内自身上皮细胞依赖性CD8+T细胞内化学反应在成果很很慢的病患中都基本不假定，但在近期得病和仍然假定的肝炎病患中都很容易验证到。这可能说明，与成果病患一般来说来说，这些病患自身免疫化学反应的调控增强。

现代数据分析说明，尽管调控性T细胞内(Treg)总数也就是说，但肝炎病患假定一些功用瑕疵，其中都包括对IL-2的化学反应潜能降低。此外，肝炎病患中都的振荡CD4+T细胞内可能对调控更具抵抗性，展示出为振荡T细胞内的减缓移向，自然导致的Treg和灌注导致的正向Treg，以及上皮细胞境遇的CD4+T细胞内中都IL-2化学反应移向。本数据分析的目的是描绘出了CD4+调控性T细胞内(Treg)在一小群极很很慢成果者中都的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

工具：BOX数据分析是一项以老年人基础上的纵向数据分析，在21岁以下胃癌的病患亲戚中都核查1HG肝炎的有可能主因。我们之后描绘出了仍然很很慢成果者的特性，他们保持良好多重人质内自身免疫球蛋白特征性超过10年，但无法消失肝炎的病理症状，很慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名之前保持良好无肝炎并想要提供大量血液循环抽样的很很慢成果者纳入T和B细胞内功用统计分析。在目前的数据分析中都，8名很慢成果者(SP三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的人质内自身免疫球蛋白特征性。所有的发起者都西北面1HG肝炎成果的1期，尽管一些人随后失去了人质内自身免疫球蛋白对某些上皮细胞的特征性化学反应，然而，一名病患已经西北面2期多于6年，但无法消失病理症状，一名病患被诊断为肝炎，该受测者72岁，在采集物理抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该供质顺利进行了除此以外评量。裂解外周血单个质侄细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内忍术和T细胞内减缓次测试评量供质中都Treg的kHz、环境主因和功用。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和回归)顺利进行无监督聚类统计分析，评量Treg环境主因。

结果：与健康供质一般来说来说，来自很慢成果质的思绪CD4+T细胞内的监督聚类标示出，激光阴的思绪CD4+ TregkHz缩减，与免疫抑制正向的TNFR相关蛋白(GITR)突显缩减有关。一名HbA1c增高的病患与成果很很慢者和匹配的印证三组一般来说来说，Treg谱并不相同。功用统计分析说明，与健康供质一般来说来说，来自很很慢成果质的Treg特异性的CD4+振荡T细胞内减缓轻微受损。展示出为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134突显的减缓缩减。

平面图1 侧重的环境主因统计分析标示出，CD4+Treg亚HG在很慢成果描绘出符中都缩减。由FlowSOM反转成的Treg室，聚集地在来自所有供质的光阴CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物突显鉴定出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内质侄Treg_1;内质侄Treg_2;内质侄Treg_3;和内质侄Treg_4。(a)常用9个不同Treg标识反转成的10个元簇的MST。每个键值代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值三组周围绘图。每个键值中都的年糕平面图问到单个标识的突显高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以标示出整质标识突显。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)反转成平面图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的基岩。(e-l)一般来说原侄量为每个metacluster装入曲本站平面图(原侄量> 0.05%)未确定为HD和SP三组:内质侄Treg_2 (e),内质侄Treg_3 (f),内质侄Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。紫色圆圈代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分三组符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 常用CITRUS的预测模HG表明，TregkHz的缩减是成果很很慢的标志。分级特异性(a - f)和葡萄统计分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的民族特色平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR突显顺利进行裂解，演示FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(星点)三组以及供质SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的kHz核心内容平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特异性偏序的装入曲本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内质侄Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内质侄Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内质侄Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内质侄T cell)。(g - i)果树簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3突显其中心著色，圆圈突出的簇被辨别为SP和HD描绘出符二者之间的不同。(j)装入曲本站平面图标示出了在SP(星点)和HD(灰点)三组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说原侄量(比例)。(k)加权标示出每个簇的环境主因(粉红色)和Treg标识一般来说突显与剧中突显(粉红色);上列，内质侄Treg_3;下面一行，内质侄Treg_4。剧中与所有其他簇中都标识的突显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分三组符号秩检验

平面图3 与健康献血者一般来说来说，成果很很慢者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内质侄Treg_2;内质侄Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个突显标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描绘出符的突显热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR突显三组合成，标示出加权(c)和核心内容平面图(d)。Wilcoxon分三组符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供质包括，p< 0.05(粉红色)供质SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR突显，从分级特异性，从所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)三组合成，标示出加权(e)和核心内容平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分三组符号秩检验

平面图4 来自很很慢成果的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的潜能降低。SP三组用粉红色的本站和圆圈问到，HD三组用粉红色的本站和圆圈问到，紫色的本站/圆圈问到供质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标识为CFSE, Treg按注意到的比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3同一天顺利进行流式细胞内忍术验证。(a-d)与CD4+此番者一般来说应的treg指导(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。常用特征性印证(激光阴的叛离细胞内不含treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T细胞内对很很慢成果的T细胞内再造的减缓更引人注意。SP三组用粉红色的本站和圆圈问到，HD三组用粉红色的本站和圆圈问到，紫色的本站/圆圈问到供质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标识，treg按注意到的比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3同一天顺利进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因侄统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE减缓百份(b)。(c,d) CD25减缓百份(c)和CD134减缓百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的突显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们推断的假设是，来自很很慢成果侄的再造思绪CD4+Treg在GITR突显中都想得到了适配和丰富，突显了进一步数据分析Treg在1HG肝炎风险形态中都的举例来说的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28