Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来肾脏自身免疫球蛋白到显现出来1改进型乳癌病理病症的十分困难率在成年人时期就有不错的说明了，多个肾脏自身免疫球蛋白无病症的成年人里有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的成年人这一数目增高到84%。相比之下之下，占病理1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的中风机制还不能获取充分的研究。

越来越多的人开始用作分期子系统来定义1改进型乳癌的十分困难：变异在显现出来多种肾脏自身免疫球蛋白时进入第1阶段性，显现出来高血压极度时进入第2阶段性，显现出来病症时进入第3阶段性。一些多发肾脏自身免疫球蛋白无病症的变异，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为中风的1改进型乳癌。我们在此之后说明了了一第组合成在首次测定到多种肾脏自身免疫球蛋白样本后比较再加10年无乳癌的很慢十分困难者，这第组合成病人人口数再加，但不同之处比较明确。随后，我们发现肾脏自身抗体依赖性CD8+T细胞核反应在十分困难极快的病人里理论上不存在，但在近期中风和曾一度存在的乳癌病人里很容易测定到。这显然表明，与十分困难病人相比之下，这些病人胃溃疡反应的调控增强。

最初研究表明，尽管调控性T细胞核(Treg)数量正常，但乳癌病人存在一些功能性缺陷，其里有数对IL-2的反应潜能下降。此外，乳癌病人里的振荡CD4+T细胞核显然对调控更具抵抗性，发挥为振荡T细胞核的减缓减弱，连续性产生的Treg和胃产生的作用于Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞核里IL-2反应减弱。本研究的目的是说明了了CD4+调控性T细胞核(Treg)在一小群极极快十分困难者里的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁所列中风的病人亲属里检查1改进型乳癌的脆弱原因。我们在此之后说明了了曾一度极快十分困难者的不同之处，他们保持稳定多重肾脏自身免疫球蛋白无病症高达10年，但不能显现出来乳癌的病理病症，慢性或非展开性胃溃疡。随后，10名独自保持稳定无乳癌并愿意提供大量血液样本的极快十分困难者划入T和B细胞核功能性数据分析。在目前的研究里，8名慢十分困难者(SP第组合成)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肾脏自身免疫球蛋白无病症。所有的与会者都位处1改进型乳癌十分困难的1期，尽管一些人随后丧失了肾脏自身免疫球蛋白对某些抗体的无病症反应，然而，一名病人已经位处2期比较再加6年，但不能显现出来病理病症，一名病人被病人为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NADPH展开了实质上审核。转化外周血单个核细胞核(PBMCs)，转用多给定流式细胞核术和T细胞核减缓试验审核NADPH里Treg的频带、表改进型和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和复归)展开无监督聚类数据分析，审核Treg表改进型。

结果：与肥胖NADPH相比之下，来自慢十分困难体的心灵CD4+T细胞核的监督聚类表明，激能活的心灵CD4+ Treg频带增高，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增高有关。一名HbA1c下降的病人与十分困难极快者和匹配的对照第组合成相比之下，Treg谱大同小异。功能性数据分析表明，与肥胖NADPH相比之下，来自极快十分困难体的Treg介导的CD4+振荡T细胞核减缓相比之下受损。发挥为对振荡CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的减缓增高。

三幅1 深入的表改进型数据分析表明，CD4+Treg亚改进型在慢十分困难函数调用里增高。由FlowSOM转化成的Treg房，聚集在来自所有NADPH的能活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示出物隐含鉴定出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不同Treg标示出转化成的10个元簇的MST。每个端口代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在端口第组合成周围成品。每个端口里的面包三幅声称单个标示出的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以表明整体标示出隐含。(c, d)为HD第组合成(c)和SP第组合成(d)转化成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的沙质。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster箱两条路1](丰度> 0.05%)未确定为HD和SP第组合成:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。蓝色带子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的预测模改进型证实，Treg频带的增高是十分困难极快的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)更为SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开转化，模拟FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(杂色)第组合成以及NADPHSP 606(蓝色)里CD25+ cd127的频带概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的箱两条路1];(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度图例，箭头引人注意的簇被辨别为SP和HD函数调用两者之间的不同。(j)箱两条路1]表明了在SP(杂色)和HD(灰点)第组合成里，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(数目)。(k)灰度表明每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标示出相对来说隐含与背景隐含(蓝色);上列，寄存器Treg_3;前面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇里标示出的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

三幅3 与肥胖献血者相比之下，十分困难极快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个隐含标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，表明灰度(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(蓝色)所有NADPH有数，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不有数在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，表明灰度(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

三幅4 来自极快十分困难的CD4+ treg细胞核掌控振荡CD4+T细胞核的潜能下降。SP第组合成用蓝色的两条路线和带子声称，HD第组合成用灰色的两条路线和带子声称，蓝色的两条路线/带子声称NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出为CFSE, Treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培植3天后展开流式细胞核术测定。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培植(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。用作无病症对照(激能活的自发细胞核另有treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

三幅5 振荡CD4+T细胞核对极快十分困难的T细胞核再生的减缓更敏感。SP第组合成用蓝色的两条路线和带子声称，HD第组合成用灰色的两条路线和带子声称，蓝色的两条路线/带子声称NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出，treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培植3天后展开流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE减缓百分比(b)。(c,d) CD25减缓百分比(c)和CD134减缓百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得出的结论是，来自极快十分困难子的再生心灵CD4+Treg在GITR隐含里获取了引入和丰富，强调了进一步研究Treg在1改进型乳癌后果变异里的异质性的有效性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28