Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现胰脏自身病原基底到不止现1DF癌症诊断患者的成果率在儿童以前就有很差的阐述，多个胰脏自身病原基底HIV的儿童之前有70%在肝脏转换后10将近肺结质子癌症，而随访15年的儿童这一%上升到84%。来得之下，占诊断1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的发病机制还没有得到更好的分析方法。

越来越多的人开始运用于依此的系统来定义1DF癌症的成果：个基底在不止现多种胰脏自身病原基底时转回第1过渡阶段，不止现胰岛素出现异常时转回第2过渡阶段，不止现患者时转回第3过渡阶段。一些多发胰脏自身病原基底HIV的个基底，在1期和2期，成果较慢，并的发展为发病的1DF癌症。我们之前阐述了一第三组在首次检测到多种胰脏自身病原基底试样后至更少10年无癌症的近乎慢成果者，这第三组病变人数更少，但特征更为清楚。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T新线粒基底反应在成果比较慢的病变之前必需不不存在，但在早先发病和由来已久的癌症病变之前很较易检测到。这意味著表明，与成果病变来得，这些病变自身免疫反应的恒定大幅提高。

早期分析方法表明，尽管恒定性T新线粒基底(Treg)数量正常，但癌症病变不存在一些功能缺陷，其之前包括对IL-2的反应能够降低。此外，癌症病变之前的现象CD4+T新线粒基底意味著对恒定更具抵抗性，平庸为现象T新线粒基底的诱发消散，共存产生的Treg和粘液产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T新线粒基底之前IL-2反应消散。本分析方法的用以是阐述了CD4+恒定性T新线粒基底(Treg)在一小群近乎比较慢成果者之前的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析方法是一项以年轻人为基础的垂直分析方法，在21岁以下确诊的病变亲属之前检查1DF癌症的致命因素。我们之前阐述了长期比较慢成果者的特征，他们维持多重胰脏自身病原基底HIV超过10年，但没有不止现癌症的诊断患者，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续维持无癌症并愿意提供大量肠道试样的比较慢成果者设为T和B新线粒基底功能分析方法。在目前的分析方法之前，8名慢成果者(SP第三组)，之前位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身病原基底HIV。所有的组织者都处于1DF癌症成果的1期，尽管一些人随后无法控制了胰脏自身病原基底对某些抗原的施打，然而，一名病变已经处于2期至更少6年，但没有不止现诊断患者，一名病变被检验为癌症，该受试者72岁，在搜集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学之前对该NAD同步进行了单独检验。分离外周血单个质子新线粒基底(PBMCs)，采用多给定流式新线粒基底忍术和T新线粒基底诱发试验车检验NAD之前Treg的kHz、环境因素和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、总括和重返)同步进行无监督聚类分析方法，检验Treg环境因素。

结果：与卫生NAD来得，来自慢成果基底的知觉CD4+T新线粒基底的监督聚类标示出，触发的知觉CD4+ TregkHz上升，与糖皮质激素诱导的TNFR无关蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的病变与成果比较慢者和匹配的印证第三组来得，Treg著者有所并不相同。功能分析方法表明，与卫生NAD来得，来自比较慢成果基底的Treg激已逝的CD4+现象T新线粒基底诱发明显损伤。平庸为对现象CD4+T新线粒基底CD25和CD134表述的诱发上升。

示意图1 深入的环境因素分析方法标示出，CD4+Treg亚DF在慢成果队列之前上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NAD的已逝CD4+CD45RA -新线粒基底上。根据上标物表述解剖不止10个元簇:知觉T新线粒基底_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T新线粒基底;HLA-DR + GITR +知觉T新线粒基底;内质子Treg_1;内质子Treg_2;内质子Treg_3;和内质子Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个终端代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在终端第三组周围剪裁。每个终端之前的甜品示意图暗示单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以标示出主基底上标表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster木箱新线示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内质子Treg_2 (e),内质子Treg_3 (f),内质子Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T新线粒基底(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T新线粒基底(l)。橘色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模DF属实，TregkHz的上升是成果比较慢的红色。分级依赖DF(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T新线粒基底上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团基底的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行分离，实时FlowSOM小团基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及NADSP 606(橘色)之前CD25+ cd127的kHz概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖DF子集的木箱新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(内质子Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内质子Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内质子Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内质子T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度制做，上标突不止的簇被标识为SP和HD队列之间的并不相同。(j)木箱新线示意图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组之前，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于丰度(%)。(k)平方和标示出每个簇的环境因素(粉红色)和Treg上标相对于表述与或多或更少表述(紫色);上列，内质子Treg_3;下面一行，内质子Treg_4。或多或更少与所有其他簇之前上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

示意图3 与卫生献血者来得，成果比较慢者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T新线粒基底元簇(知觉T新线粒基底_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T新线粒基底;HLA-DR + GITR +知觉T新线粒基底;内质子Treg_2;内质子Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之前所有HD(蓝灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表述结合，标示出平方和(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NAD包括，p< 0.05(紫色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表述，从分级依赖DF，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)结合，标示出平方和(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

示意图4 来自比较慢成果的CD4+ treg新线粒基底控制现象CD4+T新线粒基底的能够降低。SP第三组用紫色的新线和格子暗示，HD第三组用黑色的新线和格子暗示，橘色的新线/格子暗示NADsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上标为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化新线粒基底，培养3天后同步进行流式新线粒基底忍术检测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg培养(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。运用于HIV印证(触发的鼓动新线粒基底不含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 现象CD4+T新线粒基底对比较慢成果的T新线粒基底已逝化的诱发更敏感。SP第三组用紫色的新线和格子暗示，HD第三组用黑色的新线和格子暗示，橘色的新线/格子暗示NADsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上标，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化新线粒基底，培养3天后同步进行流式新线粒基底忍术(CD25反染)和新线粒基底因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一之前的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得不止的论断是，来自比较慢成果子的已逝化知觉CD4+Treg在GITR表述之前得到了扩展和丰富，重申了进一步分析方法Treg在1DF癌症风险个基底之前的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28